实验指南 | 掌握蛋白Marker选用技巧，提升电泳与转膜效率！

蛋白Marker，即蛋白分子量标准，是一种由已知分子量的多种蛋白质组成的混合物。其主要作用是在电泳或转膜过程中指示目标蛋白的位置。然而，面对预染、非预染、不同分子量范围等多种类型，如何根据实验目标做出准确选择，从而确保电泳条带清晰、转膜高效并准确定位目标蛋白呢？

 

01 蛋白Marker的功能

a) 作为分子量参照标准，用于判断目标蛋白的分子量大小；
b) 监测电泳过程的进行情况；
c) 评估Western Blot中的蛋白转膜效率。

 

02 蛋白Marker的分类

    • 预染蛋白Marker
预染蛋白Marker通过染料共价结合形成彩色条带，其最大优势在于实时可见性，能够在实验过程中提供直观参考，主要作用包括：
a) 可根据预染Marker的迁移情况，判断目标蛋白是否进入最佳分离区域，以优化电泳终止时间；
b) 若Marker出现异常迁移，可及时中断电泳，避免实验失败；
c) 转膜后可直接观察转膜是否完全，并在膜上标记蛋白分子量。
然而，由于染料共价修饰可能在不同缓冲条件下影响蛋白质的迁移行为，预染Marker在分子量判定上可能存在一定偏差，因此不适用于精确定位。

• 非预染蛋白Marker
非预染蛋白Marker在电泳过程中不可见，需在电泳结束后通过蛋白质染色方显影，属于“染色后观测”型。虽然无法在实验过程中提供实时参考，但由于其未经染料修饰，所显示的蛋白条带分子量准确，适用于精确判定蛋白大小。

 

03 蛋白Marker的功能分类选择

 

04 常见问题解答

 Q1  Marker是否需全部显带？
若说明书标注为7条带，实际电泳中出现6条带也属正常，可能与电泳时间不足有关。若非检测极小分子蛋白，建议待溴酚蓝前沿泳出凝胶后再停止电泳，通常可呈现全部条带。有时仅显示5条带，但只要目标蛋白对应分子量上下两条Marker清晰可见，即可满足一般判断需求，不必强求全部条带显现。
Q2  为何不同凝胶体系中蛋白Marker迁移行为存在差异？
在不同SDS-PAGE缓冲系统（如Bis-Tris与Tris-甘氨酸）中，相同蛋白质的迁移率可能发生轻微变化。各缓冲体系pH值不同，会影响蛋白质所带电荷及与SDS的结合能力，进而改变其电泳迁移行为。此现象在预染蛋白Marker中尤为明显，因其经化学修饰后对缓冲条件更为敏感。因此，在使用预染蛋白Marker时，建议根据实际所用的凝胶体系参考对应的表观分子量，以提高目标蛋白定位的准确性。

 

05 万生昊天产品推荐

  • 三色预染宽分子量蛋白Marker （MKPX006）常规范围（10-180 kDa），经典适用，条带清晰易辨。  
  • 三色预染宽分子量蛋白Marker（MKPX007）更宽范围（10-250 kDa），满足绝大多数蛋白检测需求。
  • 三色预染高分子量蛋白Marker （MKPX010）覆盖高分子量区间（25-300 kDa），适用于大分子蛋白检测。 
  • 彩虹预染低分子量蛋白Marker （MKPX017）低分子量范围（1.2-40 kDa），小分子蛋白与多肽检测的理想选择。

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